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          細胞基質(zhì)金屬蛋白酶12活性熒光定量檢測試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(中文版)
          時(shí)間:2023/10/10 點(diǎn)擊次數:1240

          細胞基質(zhì)金屬蛋白酶12活性熒光定量檢測試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(中文版)

           

          主要用途

           

           細胞基質(zhì)金屬蛋白酶12MMP-12)活性熒光定量檢測試劑是一種旨在通過(guò)熒光探針5-羧基熒光素供體和QXL受體標記的多肽底物RPKPVENvaWRK,在蛋白酶的水解下,解離抑制基團,產(chǎn)生熒光產(chǎn)物,即采用熒光法來(lái)測定樣品中酶活性*而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗證明的。其適用于各種細胞裂解萃取液樣品(動(dòng)物、人體)、部分或*純化酶樣品中基質(zhì)金屬蛋白酶12的定量檢測,以及抑制劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩定,安全可靠。

           

          技術(shù)背景

           

          基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix metalloproteinases;MMPs是一類(lèi)結構高度同源的分泌型或膜相關(guān)性鋅內肽酶的總稱(chēng),因含有金屬(鋅、鈣)離子而得名。其功能在于分解細胞外基質(zhì)成分。迄今為止發(fā)現的MMPs至少有28種,幾乎能降解除多糖以外的全部細胞外基質(zhì)(extracellular matrix)成分,同時(shí)參與胚胎發(fā)育、形態(tài)形成、胚泡植入(blastocyst)、血管形成、組織再吸收(tissue resorption)、疾病發(fā)生,例如關(guān)節炎、癌細胞浸入轉移等。根據降解的底物不同可將MMPs分為4大類(lèi):(1)膠原酶:MMP1、MMP8、MMP13主要消化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和蛋白多糖;(2)明膠酶(Ⅳ型膠原酶):MMP2、MMP9,又稱(chēng)明膠酶A、B,主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和彈性纖維;(3)基質(zhì)溶解素:MMP3、MMP7、MMP16、MMP11、MMP12,主要作用于纖維粘連蛋白、層粘連蛋白、彈力纖維、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ膠原及MMP1、MMP8、MMP9;(4)膜型金屬蛋白酶:MT1-MMP、MT2-MMP、MT3-MMP,主要作用于明膠、Ⅳ型膠原、MMP2。體內絕大多數細胞并不儲備MMPs,當需要MMPs的信號傳遞到細胞后才臨時(shí)合成,合成的MMPs以無(wú)活性的酶原(proenzyme)形式分泌到細胞外,隨后被多種蛋白酶和非蛋白酶水解以及熱處理激活,一種激活的MMPs可激活另一種MMPs,形成瀑布效應。基質(zhì)金屬蛋白酶12MMP12),又稱(chēng)為巨噬細胞彈力蛋白酶(macrophage elastase),其目標蛋白是彈性蛋白elastin)、纖維連接蛋白fibronectin)、層粘蛋白laminin)、纖維蛋白溶酶原plasminogen)、尿激酶型纖溶酶原激活物受體u-PAR)和組織因子通路抑制劑(tissue factor pathway inhibitor)。MMP12與吸煙型肺氣腫smoke-induced emphysema)、腫瘤和其它疾病等發(fā)生有關(guān)。MMP12酶原型為54kD,而活化型為45kD22kD。基質(zhì)金屬蛋白酶12的活性檢測通過(guò)熒光共振能量轉移法(Fluorescence resonance energy transfer;FRET),即傳遞激發(fā)狀態(tài)的能量由處于較短波長(cháng)的供體(donor到覆蓋供體波長(cháng)的受體(acceptor),使得距離依賴(lài)性反應的供體的散發(fā)光子淬滅(quench)?;诙嚯牡孜?/span>RPKPVENvaWRK兩端標記的供體熒光探針5-羧基熒光素5-carboxyfluorescein;5-FAM)受到另一個(gè)受體基團QXL的抑制而熒光淬滅(quench)。一旦多肽受到MMP12水解,釋放出具有強烈熒光的5-羧基熒光素多肽片段,據此根據其熒光強度(激發(fā)波長(cháng)490nm,散發(fā)波長(cháng)520nm)的變化,來(lái)定量測定基質(zhì)金屬蛋白酶12的活性。基質(zhì)金屬蛋白酶12反應系統為:

          MMP12

          5-FAM-RPKPVE-Nva-WRK-QXL-NH2   →    5-FAM-RPKP  +  VE-Nva-WRK-QXL-NH2 

           



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