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          銘博生物實(shí)驗室技術(shù)老師告訴您-動(dòng)物細胞培養基常見(jiàn)問(wèn)題

          更新時(shí)間:2024-04-11 點(diǎn)擊次數:650

          培養基是細胞培養中所需要的營(yíng)養成分,但是基礎的培養基卻給實(shí)驗者帶來(lái)了一系列的問(wèn)題。別小看細胞培養,這里可蘊含著(zhù)大學(xué)問(wèn)。

          1.怎樣查到一個(gè)特定細胞株的相關(guān)知識和培養條件?

          ATCC(American Type Culture Collection)收集了絕大多數細胞的詳細資料。打開(kāi)ATCC網(wǎng)頁(yè)的Cells and hybridomas鏈接,輸入細胞名稱(chēng)就可以搜索ATCC的細胞數據庫。數據庫中有每一種細胞的詳細描述,包括細胞的來(lái)源,培養和凍存條件,以及相關(guān)文獻等資料。

          2.如何選用特殊細胞系培養基?

          培養某類(lèi)型細胞沒(méi)有固定的培養條件。MEM中培養的細胞,很可能在DMEM或M199中同樣容易生長(cháng)??傊?,*MEM、DMEM做貼壁細胞培養;RPMI1640做懸浮細胞培養;各種目的無(wú)血清培養&AIMV培養基(SFM)。新的細胞培養時(shí)要詳查資料。

          3.自己新配制的液體培養基能保存多久?

          我們建議將新配制的培養基放置于4℃,避光保存盡量在一周內使用完畢。培養基越新鮮越好。

          4.培養基中添加了血清和抗生素后,可長(cháng)期保存嗎?

          一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時(shí),您應該在一到兩周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開(kāi)始降解。

          5.培養基中是否須添加抗生素?

          除了特殊篩選系統外,一般正常培養狀態(tài)下,培養基中不應添加任何抗生素。
          為防止細菌、真菌污染,可以加入青霉素-鏈霉素雙抗溶液,其培養基中的終濃度為青霉素100U/ml,鏈霉素為100ug/ml。

          6.液體培養基可以放-20℃保存嗎?

          不可以!因為在-20℃下,培養基中的鹽容易析出,培養基融化后,有的鹽可能無(wú)法重新溶解,從而導致培養基滲透壓降低,培養細胞時(shí),細胞容易破裂而死亡。

          7.為何培養基保存于4℃冰箱中,顏色會(huì )偏暗紅色,且pH值越來(lái)越偏堿性?

          培養基保存于4℃冰箱中, 培養基內之CO2 會(huì )逐漸溢出,造成培養基越來(lái)越偏堿性。而培養基中之酸堿指示劑(通常為phenol red) 的顏色也會(huì )隨堿性增加而更偏暗紅。培養基偏堿之結果, 將造成細胞生長(cháng)停滯或死亡。若培養基偏堿時(shí), 可以通入無(wú)菌過(guò)濾之CO2, 以調整pH 值。

          8.為什么你公司液體培養基1640顏色發(fā)黃,是pH值不對嗎?

          不是。因為配方原因,1640為堿酚紅型,其中酚紅的濃度只有DMEM的四分之一,所以是因為酚紅濃度低,而非PH值低。

          9.培養液pH是怎樣影響細胞生長(cháng)的?

          由于大多數細胞適宜PH值為7.2-7.4,偏離此范圍對細胞將產(chǎn)生有害的影響。各種細胞對PH值要求也不*相同,原代細胞培養一般對PH值變動(dòng)耐受差,無(wú)限細胞系耐受力強。 但總體來(lái)說(shuō),細胞耐酸性比耐堿性強一些,偏酸環(huán)境中更有利于細胞的生長(cháng)。因此,配制培養用液時(shí)可把液體的PH值稍微調的偏酸一些。液體在經(jīng)過(guò)0.1um或0.2um濾膜過(guò)濾時(shí),PH值會(huì )向上浮動(dòng)0.2左右。

          10.培養液滲透壓是怎樣影響細胞生長(cháng)的?

          當細胞內、外環(huán)境的分子濃度不同時(shí)就會(huì )產(chǎn)生滲透壓。這種情況下,水分通過(guò)滲透流入或流出細胞,從而改變細胞的內環(huán)境。高滲透壓迫使水分從細胞中擴散出來(lái)導致細胞收縮,這種情況會(huì )使DNA和蛋白遭到破壞,細胞周期停滯以及zui終使細胞死亡;反之,低滲透壓使水分流入細胞內,使細胞腫脹破裂。

          11.為什么有客戶(hù)要求培養基中不含酚紅?

          研究表明,酚紅可以模擬固醇類(lèi)激素的作用(特別是雌激素)。為避免固醇類(lèi)反應,細胞培養,尤其是哺乳類(lèi)細胞時(shí),用不加酚紅的培養基。由于酚紅干擾檢測,一些研究人員在做流式細胞檢測時(shí),不使用加酚紅的培養基。

          12.酚紅的作用是什么?

          酚紅在培養基中被用來(lái)作為PH值指示劑:中性時(shí)為紅色,酸性時(shí)為黃色,堿性時(shí)為紫色。

          13.你公司干粉培養基里含NaHCO3嗎?

          所有的干粉培養基中都不含NaHCO3 。請依據說(shuō)明書(shū)或包裝袋上的標注,在干粉培養基*溶解后添加NaHCO3 。

          14.NaHCO3的作用是什么?

          與CO2一起形成緩沖系統,保持培養基PH值穩定。

          15.我們實(shí)驗室培養箱CO2濃度一直以來(lái)都是5%,這樣可以嗎?

          當然不可以,不同的培養基要求添加NaHCO3的量不一樣,如DMEM要求添加3.7g/L,為了保持PH值穩定,必須用高濃度的CO2平衡,一般不低于8%,而1640等要求添加NaHCO3 2.2g/L,還有些培養基要求添加更少,那么這些培養基就要求較低的濃度平衡,一般是5%。

          16.培養基中丙酮酸鈉的作用是什么?

          丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源,盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,但是如果沒(méi)有葡萄糖的話(huà),細胞也可以代謝丙酮酸鈉。

          丙酮酸鈉的貯存液濃度一般為50mM,-20℃保存,培養基中的終濃度為1mM.

          17.谷氨酰胺的作用是什么?

          幾乎所有的細胞對谷氨酰胺都有較高的要求。谷氨酰胺脫掉氨基后,可作為培養細胞的能量來(lái)源,參與蛋白質(zhì)的合成和能量代謝。在缺少谷氨酰胺時(shí),細胞生長(cháng)不良而死亡。所以,各種培養液中都含有較大量的谷氨酰胺。

          谷氨酰胺在溶液中很不穩定,應置-20℃冰凍保存,用前加入培養基中。加有谷氨酰胺的液體培養基4度冰箱儲存兩周以上時(shí),應重新加入原來(lái)量的谷氨酰胺。

          18.在培養基中加入HEPES有何好處?

          培養基中zui常用的Buffer system是碳酸氫鹽,它可提供營(yíng)養,但卻在生理PH值條件下會(huì )降低緩沖能力。而HEPES是一種很強的Buffer,加入HEPES能使細胞培養基在PH7.2-7.6條件下緩沖能力增強。

          Hepes的貯存液濃度一般為1M,常溫保存。培養基中的終濃度為25mM,即5ml 1M的Hepes加入到200ml*培養基中。

          19.GlutaMAX-Ⅰ是什么?培養細胞如何利用GlutaMAX-Ⅰ?這個(gè)二肽有多穩定?

          GlutaMAX-Ⅰ是一個(gè)L-谷氨酰胺的衍生物,其不穩定的a-氨基用L-丙氨酸來(lái)保護。一種肽酶逐漸裂解二肽,釋放L-谷氨酰胺供利用。

          GlutaMAX-Ⅰ二肽非常穩定,即使在121℃滅菌20min, GlutaMAX-Ⅰ二肽溶液有zui小的降解;而在相同條件下,L-谷氨酰胺幾乎*降解。

          L-谷氨酰胺在細胞培養時(shí)是重要的,但其在溶液中不穩定,經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后會(huì )降解,確切的降解率一直沒(méi)有zui終確定。L-谷氨酰胺的降解導致氨的形成,而氨對于一些細胞具有毒性。因此GlutaMAX-Ⅰ是細胞培養中谷氨酰胺的替代品。

          20.可否使用與原先培養條件不同的培養基?

          不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養基,若驟然使用和原先提供之培養條件不同的培養基,細胞大多無(wú)法立即適應,造成細胞無(wú)法存活。



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